Las mutaciones sin sentido relacionadas con codones de terminación prematuros en líneas celulares 16HBEo- corregidas tienen una sensibilidad diferente al sistema de degradación de ARNm

Las líneas celulares de expresión heteróloga tienen un interés limitado, ya que no contienen intrón y, en el contexto del estudio de las mutaciones sin sentido relacionadas con defectos de codones de terminación prematuros (PTC), no permiten estudiar el sistema NMD que degrada los ARNm portadores de estos PTC.

La línea celular establecida por D Gruenert, 16HBE14o- se ha inmortalizado mediante SV40 y es sensible al sistema NMD. Esto ha permitido generar por CRISPR/Cas9 diferentes líneas homocigotas para G542X, W1282X, Y122X, R553X, R1162X, G551D, N1303K y F508Del en un contexto V470 o M470. Para las mutaciones sin sentido, estos modelos permiten probar el nivel del sistema de degradación de los ARNm en estado basal. Esto ha hecho posible verificar que el valor de transcripción está reducido para las 3 mutaciones: G542X, W2283X y Y122X, como se esperaba. Esta líneas también permiten una evaluación farmacológica diferencial, de la inhibición del NMD por SMG1, un potente inhibidor de NMD, y la translectura mediante G418. La inhibición del NMD se verifica por el valor de ARNm corregido y la translectura por la restauración de la actividad de CFTR en la cámara de Ussing. Por ejemplo, la mutación W1282X es muy sensible al sistema NMD pero apenas responde a G418, al contrario que Y122X.

Estas observaciones muestran que el contexto del PTC influye en la translectura e ilustran la relevancia de estas líneas celulares.

Referencia

CONGRESO NACFC 2018 - Sábado 20 de octubre de 2018
Modelos in vitro de FQ
W16.4 Resumen 164 – Las variantes PTC CFTR expresadas en líneas 16HBE14O-cel de edición génica muestran sensibilidad diferencial a la degradación mediada por mutaciones sin sentido
Ponente: HC Valley